V práci zaměřené na kultivaci želvušek byly zkoumány vlivy různých kultivačních médií na životaschopnost zásobních buněk želvušek a samotných želvušek. Želvušky byly izolovány z mechorostů z lokalit Ústí nad Orlicí, Hamr na Jezeře a Sloup v Čechách pomocí extrakční techniky s využitím sítka. Hlavním cílem práce bylo pozorovat, jak jednotlivá kultivační média ovlivňují životaschopnost zásobních buněk želvušek. K tomuto účelu bylo testováno devět médií. Zároveň byl sledován vliv těchto médií na životaschopnost samotných želvušek. Výsledky ukázaly, že v všech devíti testovaných médiích byly nalezeny živé želvuščí buňky. Z toho lze usoudit, že všechna zkoumaná média poskytovala potřebné živiny a podmínky pro přežití želvušek. Dále bylo zjištěno, že osm z těchto devíti médií podporovalo pohyb želvušek. To naznačuje, že tato média měla pozitivní vliv na vitalitu a aktivitu želvušek.
Anotace v angličtině
In the work focused on the culture of tardigrades, the effects of different culture media on the viability of stock cells and the tardigrades themselves were investigated. The tardigradess were isolated from bryophytes from the localities of Ústí nad Orlicí, Hamr na Jezeře and Sloup in Bohemia using a sieve extraction technique. The main aim of the work was to observe how different culture media affect the viability of the tardigrades storage cells. Nine media were tested for this purpose. At the same time, the effect of these media on the viability of the tardigrades themselves was observed. The results showed that viable tardigrades cells were found in all nine media tested. It can be concluded that all the media tested provided the necessary nutrients and conditions for the survival of the tardigrades. Furthermore, eight of these nine media were found to support tardigrades movement. This suggests that these media had a positive effect on the vitality and activity of the tardigrades.
Klíčová slova
želvušky, zásobní buňky, mechová fauna, buněčná kultura
V práci zaměřené na kultivaci želvušek byly zkoumány vlivy různých kultivačních médií na životaschopnost zásobních buněk želvušek a samotných želvušek. Želvušky byly izolovány z mechorostů z lokalit Ústí nad Orlicí, Hamr na Jezeře a Sloup v Čechách pomocí extrakční techniky s využitím sítka. Hlavním cílem práce bylo pozorovat, jak jednotlivá kultivační média ovlivňují životaschopnost zásobních buněk želvušek. K tomuto účelu bylo testováno devět médií. Zároveň byl sledován vliv těchto médií na životaschopnost samotných želvušek. Výsledky ukázaly, že v všech devíti testovaných médiích byly nalezeny živé želvuščí buňky. Z toho lze usoudit, že všechna zkoumaná média poskytovala potřebné živiny a podmínky pro přežití želvušek. Dále bylo zjištěno, že osm z těchto devíti médií podporovalo pohyb želvušek. To naznačuje, že tato média měla pozitivní vliv na vitalitu a aktivitu želvušek.
Anotace v angličtině
In the work focused on the culture of tardigrades, the effects of different culture media on the viability of stock cells and the tardigrades themselves were investigated. The tardigradess were isolated from bryophytes from the localities of Ústí nad Orlicí, Hamr na Jezeře and Sloup in Bohemia using a sieve extraction technique. The main aim of the work was to observe how different culture media affect the viability of the tardigrades storage cells. Nine media were tested for this purpose. At the same time, the effect of these media on the viability of the tardigrades themselves was observed. The results showed that viable tardigrades cells were found in all nine media tested. It can be concluded that all the media tested provided the necessary nutrients and conditions for the survival of the tardigrades. Furthermore, eight of these nine media were found to support tardigrades movement. This suggests that these media had a positive effect on the vitality and activity of the tardigrades.
Klíčová slova
želvušky, zásobní buňky, mechová fauna, buněčná kultura
Želvušky (kmen Tardigrada) jsou mikroskopičtí bezobratlí s adaptací na přežití extrémních environmentálních podmínek (např. desikaci) prostřednictvím ametabolického stavu kryptobiózy. Patří také mezi radio-resistentní organismy. Ačkoli bylo publikováno několik studií zaměřených na jejich buněčnou biologii a biochemické mechanismy s cílem objasnit jejich desikační toleranci, tyto buněčné a molekulární základy dosud nejsou plně objasněny. Dosud také není vytvořena buněčná kultura. Cílem práce je a) vytipovat vhodné médium pro založení primární buněčné kultury buněk želvušek, b) otestovat možnost kultivace buněk želvušek
Zásady pro vypracování
Želvušky (kmen Tardigrada) jsou mikroskopičtí bezobratlí s adaptací na přežití extrémních environmentálních podmínek (např. desikaci) prostřednictvím ametabolického stavu kryptobiózy. Patří také mezi radio-resistentní organismy. Ačkoli bylo publikováno několik studií zaměřených na jejich buněčnou biologii a biochemické mechanismy s cílem objasnit jejich desikační toleranci, tyto buněčné a molekulární základy dosud nejsou plně objasněny. Dosud také není vytvořena buněčná kultura. Cílem práce je a) vytipovat vhodné médium pro založení primární buněčné kultury buněk želvušek, b) otestovat možnost kultivace buněk želvušek
Seznam doporučené literatury
Bertolani R., 1970a. Mitosi somatiche e constanza cellular numerica nei Tardigradi. Atti Accad Naz Lincei Rc Ser 8a 48: 739-742.
Bertolani R., 1970b. Variabilita numerica cellulare in alcuni tessuti di Tardigradi. Atti Accad Naz Lincei Rc Ser 8a 49: 442-446.
Baines, D., 1996. New approaches to insect tissue culture. Cytotechnology, 20, 13–22.
Bertolani R., Rebecchi L., 2018. Cytologi and cytogenetics. In: Schill R.O. (ed) Water bears: the biology of tardigrades. Springer, New York, pp 145-161.
Boothby T.C., Tapia H., Brozena A.H., Peskiewicz S., Smith A.E., Giovannini I., Rebecchi L., Pielak G.J., Koshland D., Goldstein B., 2017. Tardigrades use intrinsically disordered proteins to survive desiccation. Mol Cell 65(6): 975-984.e5
Czerneková M., Janelt K., Student S., Jönsson K.I., Poprawa I., 2017. The structure of desiccated Richtersius coronifer (Richters, 1903). Protoplasma 254(3): 1367-1377.
Czernekova M., Jönsson K.I., 2016. Experimentally Induced Repeated Anhydrobiosis in the Eutardigrade Richtersius coronifer, PLoS One 11: e0164062. DOI: 10.1371/journal.pone.0164062
Czerneková M., Jönsson K.I., Chajec L., Student S., Poprawa I., 2017. The structure of the desiccated Richtersius coronifer (Richters, 1903), Protoplasma 254: 1367–1377. DOI: 10.1007/s00709-016-1027-2
Davis J., 2011. Animal Cell Culture; Essential Methods.
Gross V., Bährle R., Mayer G., 2018. Detection of cell proliferation in adults of the water bear Hypsibius dujardini (Tardigrada) via incorporation of a thimidine analog. Tissue Cell 51: 77-83.
Hashimoto T., Kunieda T., 2017. DNA protection protein, a novel mechanism of radiation tolerance: lessons from tardigrades. Life 7(2): 26.
Hashimoto T., Horikawa D.D., Saito Y., Kuwahara H., Kozuka-Hata H., Shin-I T., Minakuchi Y. et al., 2016. Extremotolerant tardigrade genome and improved radiotolerance of human cultured cells by tardigrade-unique protein. Nat Commun 7: 12808.
Jönsson K.I., Holm I., Tassidis. Cell biology of tardigrades: Current knowledge and perspectives in Tworzydlo W., Bilinski S.M. (eds.), Evo-Devo: Non-model species in cell and developmental biology, Results and problems in cell differentation 68.
Lynn D.E., 1999. Development of insect cell lines: Virus susceptibility and applicability to prawn cell culture. Methods in Cell Science, 21, 173–181.
Lynn D.E., 2001. Novel techniques to establish new insect cell lines. In vitro cellular & developmental biology. Animal, 37, 319–21.
Lynn, D.E., 2002. Methods for maintaining insect cell cultures. Journal of insect science 68 2, 9.
Ramazzotti G., Maucci W., 1983. Il phylum Tardigrada (The phylum Tardigrada), Mem. Ist. Ital. Idrobiol. Dott. Marco Marchi 41: 1014 (An English translation, C. Beasley).
Vlak J.M., Gooijer C.D. de, Tramper J., Miltenburger H.G., 2006. Insect Cell Cultures: Fundamental and Applied Aspects Springer Science & Business Media.
Yoshida Y., Koutsovoulos G., Laetsch D.R., Stevens L., Kumar S., Horikawa D.D., Ishino K., Komine S., Kunieda T., Tomita M., Blaxter M., Arakawa K., 2017. Comparative genomics of the tardigrades Hypsibius dujardini and Ramazzottius varieornatus, PLOS Biol. 15: e2002266. DOI: 10.1371/journal.pbio.2002266
Seznam doporučené literatury
Bertolani R., 1970a. Mitosi somatiche e constanza cellular numerica nei Tardigradi. Atti Accad Naz Lincei Rc Ser 8a 48: 739-742.
Bertolani R., 1970b. Variabilita numerica cellulare in alcuni tessuti di Tardigradi. Atti Accad Naz Lincei Rc Ser 8a 49: 442-446.
Baines, D., 1996. New approaches to insect tissue culture. Cytotechnology, 20, 13–22.
Bertolani R., Rebecchi L., 2018. Cytologi and cytogenetics. In: Schill R.O. (ed) Water bears: the biology of tardigrades. Springer, New York, pp 145-161.
Boothby T.C., Tapia H., Brozena A.H., Peskiewicz S., Smith A.E., Giovannini I., Rebecchi L., Pielak G.J., Koshland D., Goldstein B., 2017. Tardigrades use intrinsically disordered proteins to survive desiccation. Mol Cell 65(6): 975-984.e5
Czerneková M., Janelt K., Student S., Jönsson K.I., Poprawa I., 2017. The structure of desiccated Richtersius coronifer (Richters, 1903). Protoplasma 254(3): 1367-1377.
Czernekova M., Jönsson K.I., 2016. Experimentally Induced Repeated Anhydrobiosis in the Eutardigrade Richtersius coronifer, PLoS One 11: e0164062. DOI: 10.1371/journal.pone.0164062
Czerneková M., Jönsson K.I., Chajec L., Student S., Poprawa I., 2017. The structure of the desiccated Richtersius coronifer (Richters, 1903), Protoplasma 254: 1367–1377. DOI: 10.1007/s00709-016-1027-2
Davis J., 2011. Animal Cell Culture; Essential Methods.
Gross V., Bährle R., Mayer G., 2018. Detection of cell proliferation in adults of the water bear Hypsibius dujardini (Tardigrada) via incorporation of a thimidine analog. Tissue Cell 51: 77-83.
Hashimoto T., Kunieda T., 2017. DNA protection protein, a novel mechanism of radiation tolerance: lessons from tardigrades. Life 7(2): 26.
Hashimoto T., Horikawa D.D., Saito Y., Kuwahara H., Kozuka-Hata H., Shin-I T., Minakuchi Y. et al., 2016. Extremotolerant tardigrade genome and improved radiotolerance of human cultured cells by tardigrade-unique protein. Nat Commun 7: 12808.
Jönsson K.I., Holm I., Tassidis. Cell biology of tardigrades: Current knowledge and perspectives in Tworzydlo W., Bilinski S.M. (eds.), Evo-Devo: Non-model species in cell and developmental biology, Results and problems in cell differentation 68.
Lynn D.E., 1999. Development of insect cell lines: Virus susceptibility and applicability to prawn cell culture. Methods in Cell Science, 21, 173–181.
Lynn D.E., 2001. Novel techniques to establish new insect cell lines. In vitro cellular & developmental biology. Animal, 37, 319–21.
Lynn, D.E., 2002. Methods for maintaining insect cell cultures. Journal of insect science 68 2, 9.
Ramazzotti G., Maucci W., 1983. Il phylum Tardigrada (The phylum Tardigrada), Mem. Ist. Ital. Idrobiol. Dott. Marco Marchi 41: 1014 (An English translation, C. Beasley).
Vlak J.M., Gooijer C.D. de, Tramper J., Miltenburger H.G., 2006. Insect Cell Cultures: Fundamental and Applied Aspects Springer Science & Business Media.