I. Základy separačních metod * Centrifugační metody v bioanalytice (diferenciální, zonální, izopyknická) * Chromatografické metody v bioanalytice (afinitní chromatografie, IEC, RP-LC, GPC) * Hmotnostní spektroskopie biomolekul (MALDI-TOF/MS, ESI-MS) * Principy elektroforetických metod - elektroforéza proteinů a DNA, isoelektrická fokusace, kapilární elektroforéza II. Imunochemické a enzymatické metody * Základy enzymologie, stanovení aktivit volných a imobilizovaných enzymů, enzymové metody stanovení analytů, metody stanovení substrátů, aktivátorů a inhibitorů enzymových reakcí. * Protilátky. Struktura a funkce antigenů. Příprava monoklonálních, polyklonálních a rekombinantních protilátek, charakterizace a značení. Interakce protilátka - antigen, afinita, specifita, křížové reakce. * Imunochemická stanovení - precipitační a neprecipitační imunochemické metody, enzymová imunoanalýza (ELISA), fluorescenční imunoanalýza, radioimunoanalýza (RIA), Western blotting a dot blotting, FACS - fluorescence activated cell sorting III. Optické detekční metody * Spektroskopické a fluorescenční metody studia biomolekul (UV-VIS spektroskopie, spektroskopie v infračervené oblasti, fluorescenční spektroskopie), stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů - Biuretová metoda, Lowryho metoda, BCA metoda, Metoda Bradfordové, přímá spektrofotometrická stanovení, fluorescenční stanovení. IV. Základy optické mikroskopie * Význam optické mikroskopie v biologickém a biomedicinském výzkumu - teorie světla, lom, odraz, difrakce, inteference a polarizace mikroskop a jeho součásti, vytváření obrazu v mikroskopu, Köhlerovo osvětlení, optické vady v mikroskopii, objektivy a jejich dělení, metody světlého a tmavého pole, fázový kontrast, interferenční kontrast a polarizace. * Fluorescenční mikroskopie - fluorescence a autofluorescence, fluorescenční mikroskop a jeho součásti, detektory pro fluorescenční mikroskopii, * Konfokální laserová skenovací mikroskopie - konfokální mikroskop, jeho princip a součásti, zdroje pro konfokální mikroskopii, děliče svazků, konfokální apertura, detektory, skenery? Pokročilé techniky optické mikroskopie - FRAP, FRET, vícefotonová mikroskopie, elektrofyziologie, Second Harmonic Generation, Third Harmonic Generation, FLIM, FCS, FLIM-FRET, FCCS, RICS, CARS. * Superrozlišovací techniky optické mikroskopie - mikroskopické techniky za difrakčním limitem ve widefield a konfokální mikroskopii - např. 4PI a SIM, dále nanometrové techniky - STED, PALM, STORM, apod. * Dlouhodobé sledování živých buněk - klimaboxy a nároky na ně, použité materiály, snímání, autofokusovací metody - hardwarový a softwarový autofokus, dekonvoluce, sledování pohybu vzorku, základní zpracování obrazu - komerční a freeware software * Metody přípravy mikroskopických vzorků pro optickou mikroskopii - kultivační metody, fluorescenční barvení V. Základy molekulárně-biologických metod * Základy molekulárně-biologických metod (izolace a přečištění DNA, štěpení a ligace DNA, separace DNA, sekvenace DNA a proteinů, syntéza oligonukleotidů a peptidů) * Základy genového inženýrství (rekombinantní DNA, klonování DNA, cDNA knihovny, klonovací a expresní vektory, GMO) Praktická část kurzu * Separační techniky (dialýza, filtrace, gelová chromatografie, SDS-PAGE elektroforéza, HPLC-GPC) * Základy optických detekčních metod (spektroskopie v UV-VIS a infračervené oblasti, spektrofluorimetrie, stanovení proteinů a nukleových kyselin) * Základy molekulárně-biologických metod (restrikční analýza DNA, izolace a přečištění DNA * Mikroskopické techniky (příprava preparátů pro světelnou mikroskopii, práce s fluorescenčním mikroskopem, konfokálním laserovým skenovacím mikroskopem, s multifotonovým mikroskopem, SHG a FLIM
|