1. Základy elektronové mikroskopie Mikroskopické metody zkoumání biologických objektů; výhody a omezení optických mikroskopických metod; vlastnosti světelného záření; základní pojmy charakterizující mikroskopické metody: zvětšení, rozlišení; historický přehled vývoje elektronové mikroskopie 2. Základní pojmy elektronové mikroskopie Fyzikální principy EM; fyzikální vlastnosti elektronů; konstrukce elektronových mikroskopů; rozdíly mezi transmisní elektronovou mikroskopií a rastrovací elektronovou mikroskopií; omezení EM vycházející z konstrukce přístrojů; principy vakuové techniky; rozlišení elektronového mikroskopu 3. Transmisní elektronový mikroskopKonstrukce; jednotlivé části; základní ovládání přístroje uživatelem; jednotlivé typy signálů generované elektronovým paprskem a jejich využití z získávaní obrazu; princip zvětšení v TEM; typické módy práce transmisního elektronového mikroskopu. 4. Rastrovací elektronový mikroskop (SEM) Konstrukce; jednotlivé části; základní ovládání přístroje uživatelem; jednotlivé typy signálů generované elektronovým paprskem a jejich využití z získávaní obrazu; princip zvětšení v SEM; typické módy práce rastrovacího elektronového mikroskopu 5. Metody zkoumání biologických vzorkůLupy; binolupy; optické mikroskopy; elektronové mikroskopy; mikroskopy atomárních sil 6. Příprava preparátů biologických vzorků pro elektronovou mikroskopiiSušené archivní vzorky (materiál z herbářů, entomologických sbírek, apod); živý materiál, fyzikální a chemické metody jeho zpracovávání; biologické pufry, základy fixace, odvodňování a preparace povrchů; minimalizace vzniku artefaktů, rozlišení biologických vzorků 7. Záznam obrazu v rastrovacím elektronovém mikroskopu Principy tvorby a záznamu obrazu v TEM; základy digitálního zobrazování; rozlišení digitálního obrazu; kalibrace digitálního záznamu; ukládání a archivace digitálních snímků 8. Záznam obrazu v rastrovacím elektronovém mikroskopu Principy tvorby a záznamu obrazu v SEM; základy digitálního zobrazování; rozlišení digitálního obrazu; kalibrace digitálního záznamu; ukládání a archivace digitálních snímků 9. Zpracování digitálních mikroskopických dat Software pro záznam a úpravu obrazu elektronových mikroskopů; základy analýzy obrazu, komerční a volně dostupný software pro úpravu snímků; publikování mikroskopických obrazů; etika při finální úpravě digitálních záznamů, požadavky pro úpravu digitálních obrazů pro presentace a publikování v elektronických i tištěných médiích 10. Praktické ukázky práce na elektronových mikroskopechPráce v jednotlivých zobrazovacích režimech elektronových mikroskopů, použití jednotlivých detektorů signálu pro záznam obrazových dat z konkrétních preparátů 11. Příprava jednoduchých biologických preparátů a jejich analýza v elektronovém mikroskopu. Každý ze studentů v rámci kursu měl připraví jednoduchý preparát pro transmisní elektronový mikroskop a jednoduchý preparát pro rastrovací elektronový mikroskop. Z připravených preparátů nasnímá sadu obrázků. Ze zaznamenaných dat potom připraví krátké sdělení (10 min) ve formě presentace (PowerPoint, Impress či Latex-Beamer) a k presentaci připraví dvoustránkový abstrakt v PDF formátu s jednou stranou textu a jednou stranou obrázků. Abstrakt musí splňovat požadavky na tisk obrázků (300 DPI). Kurs bude zakončen znalostním testem.
|
-
Bartl, P.; Delong, A.; Drahoš, V.; Hrivňák, I. & Rosenberg. ), Metody elektronové mikroskopie, Nakladatelství Československé akademie věd, Praha 1964..
-
Edited by M. A. Nasser Hajibagheri. Electron microscopy methods and protocols. Totowa, NJ, USA: Humana Press, 1999. pp.283 (paper)..
-
Joseph Goldstein, Dale E. Newbury, David C. Joy, Charles E. Lyman, Patrick Echlin, Eric Lifshin, Linda C. Sawyer, J.R. Michael (Eds.). Scanning Electron Microscopy and X-Ray Microanalysis. Kluwer Academic/Plenum Publishers, New York/Boston/Dordrecht/London/Moscow, 2003, pp. 689.
-
Kalina T., Pokorný V. Základy elektronové mikroskopie pro biology.. PřF UK Praha, 1981.
-
Ludvík, J. Vybrané metody v mikrobiologii, Academia Praha, Cudlín, J., ed., kapitola Elektronová mikroskopie, pp. 54-104.. 1981.
-
Michael J. Dykstra, Laura E Reuss. Biological Electron Microscopy - Theory, Techniques, and Troubleshooting - Second Edition. Kluwer Academic/Plenum December 2003, pp. 534.
-
Proser, V. & kolektiv. Experimentální metody biofyziky, Academia Praha, kapitola Elektronový mikroskop, pp. 276-313. 1989.
|